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        倉鼠Ca-ATP酶試劑盒酶聯(lián)免疫吸附試驗法操作步驟

        點擊次數(shù):1216 更新時間:2020-05-07

        倉鼠Ca-ATP酶(Ca-ATPase)試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)操作步驟:

        1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

        2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

        3.  樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

        4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

        5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

        6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

        7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

        [實驗結(jié)果計算]

        以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。

        [試劑盒性能]

        1. 檢測范圍:0.25 μmol/mL – 8 μmol/mL。

        2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于0.1 μmol/mL。

        3. 特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

        4. 重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。

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